Dos aislamientos de Salmonella Infantis multirresistentes se comportan como hipoinvasivos pero con elevada proliferación intracelular

En este trabajo se investigó la presencia de determinantes característicos de plásmidos de virulencia en dos aislamientos clínicos de Salmonella Infantis portadores de plásmidos de multirresistencia. Además, se estudió la capacidad de invasión y proliferación en células eucariotas no fagocíticas. Ninguno de los aislamientos de S. Infantis mostró los determinantes genéticos que caracterizan a los plásmidos de virulencia para este género (operón spv). Los ensayos de invasión sobre líneas celulares eucariotas mostraron que los aislamientos de S. Infantis presentan una capacidad de invasión disminuida pero persisten y proliferan en el citoplasma, independientemente de utilizar una línea celular permisiva (HeLa) o no permisiva (NRK) para tal fin. Finalmente, no se observaron indicios microscópicos que podrían hacer sospechar un efecto bactericida de estas líneas celulares sobre los aislamientos estudiados.

Two multidrug-resistant Salmonella Infantis isolates behave like hypo-invasive strains but have high intracellular proliferation. In this work, plasmid-encoded virulence factors in two Salmonella Infantis isolates carrying multiresistance plasmids were investigated. In addition, their invasion and proliferative ability in non-phagocytic cells was studied. None of them showed the typical determinants of virulence plasmids (spv operon). The invasion assays of S. Infantis isolates on eukaryotic cells showed a decreased ability to Invade but they remained and proliferated In the cytoplasm regardless of having used a permissive (HeLa) or non-permissive (NRK) cell line. Finally, there was no microscopic evidence suggesting a bactericidal effect of these eukaryotic cell lines on the Isolates tested.

Construcción de mutantes de salmonella enterica por inactivación de los genes invG/invE y ssaJ/ssaK de las islas de patogenicidad 1 y 2 / Construction of mutants of salmonella enterica for inactivation of invG/invE y ssaJ/ssaK genes of pathogenicity islands 1 and 2

Para la comprensión de las bases genéticas de los mecanismos de patogenicidad de Salmonella se han descrito diversas metodologías para manipular el ADN genómico y generar mutantes con características particulares. En este estudio se reporta la construcción de mutantes a partir de varios serotipos de S. enterica, por sustitución e inactivación de los genes invG/invE en SPI-1 y de los genes ssaJ/ssaK en SPI-2 mediante la técnica de recombinasa Red del fago λ descrita por Datsenko y Wanner (2000). Los genes delecionados en las SPI-1 y SPI-2 codifican para las proteínas que participan en la formación de los sistemas de secreción tipo III, responsables de la invasión y supervivencia intracelular de S. enterica en las células hospedadoras. Los resultados de este trabajo permitirán realizar estudios futuros in vivo para evaluar la posible atenuación de la virulencia de las cepas mutantes, así como aportar nuevos conocimientos sobre los mecanismos genéticos involucrados en la fisiopatogenia de las enfermedades producidas por los serovares estudiados. Además, esta técnica se recomienda para generar de manera eficiente mutantes de diferentes serotipos de S. enterica con la finalidad de estudiar los genes cromosómicos y sus productos.

To understand the genetic basis of Salmonella pathogenicity mechanisms, various methods have been described to manipulate and generate mutant genomic DNA with specific characteristics. In this study we report the construction of mutants from several serotypes of S. enterica, substitution and inactivation of genes invG/invE in SPI-1 gene and ssaJ/ssaK in SPI-2 by the technique of phage λ Red recombinase, as described by Datsenko and Wanner (2000). The gene deletion in SPI-1 and SPI-2 encodes proteins involved in the formation of type III secretion systems responsible for the invasion and intracellular survival of S. enterica in the host cells. The results of this work will allow in vivo studies to evaluate the possible attenuation of virulence of the mutant strains, as well as to provide new insights into the genetic mechanisms involved in the pathogenesis of diseases caused by these bacteria. Moreover, this technique is recommended to efficiently generate mutants of different serotypes of S. enterica in order to study the chromosomal genes and their products.